食品安全国家标准食品中果聚糖的测定标准GB 5009.255-2016是由中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布于2016年08月31日，2017年03月01日实施。本标准适用于乳及乳制品、婴幼儿配方食品、婴幼儿谷类辅助食品、固体饮料、配制酒中单独添加的低聚果糖、多聚果糖或菊粉含量的测定。本标准规定了食品中果聚糖含量的离子色谱法测定方法（范围、原理、试剂和材料、仪器和设备、分析步骤、分析结果的表述、精密度及其他的）。

1、范围

本标准规定了食品中果聚糖含量的离子色谱法测定方法。

本标准适用于乳及乳制品、婴幼儿配方食品、婴幼儿谷类辅助食品、固体饮料、配制酒中单独添加的低聚果糖、多聚果糖或菊粉含量的测定。

2、原理

试样经热水浸提，样液中的蔗糖经蔗糖酶水解成葡萄糖和果糖，葡萄糖和果糖经硼氢化钠还原成相应的糖醇，多余的硼氢化钠用乙酸中和。样液中的果聚糖经过果聚糖酶水解成果糖和葡萄糖，经离子色谱-脉冲安培检测器测定果糖含量，通过换算系数，折算得到果聚糖的含量。

3、试剂和材料

3.1、试剂

除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

3.1.1、氢氧化钠（NaOH）

3.1.2、马来酸（C4H4O4）

3.1.3、蔗糖酶：来源于酵母，酶活力≥300U

3.1.4、硼氢化钠（NaBH4）

3.1.5、冰乙酸（CH3COOH）

3.1.6、三水乙酸钠（CH3COONa·3H2O）

3.1.7、果聚糖酶：来源于黑曲霉，酶活力≥10000U

3.1.8、50%氢氧化钠溶液（NaOH）：色谱纯

3.1.9、无水乙酸钠（CH3COONa）：纯度≥99.0%

3.1.10、氮气（N2）：纯度≥99.9%

3.2、试剂配制

3.2.1、氢氧化钠溶液（1mol/L）：称取40g氢氧化钠（精确至0.01g），溶于水并稀释至1000mL，室温下可放置2个月。

3.2.2、马来酸钠缓冲溶液（100mmol/L，pH6.5）：称取1.16g马来酸（精确至0.01g）于150mL烧杯中，加入约70mL水溶解，用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH6.5，用水稀释至100mL。4℃保存，可放置3个月。

3.2.3、蔗糖酶溶液（4.5U/mL）：将蔗糖酶（活力为300U）溶解于66mL马来酸钠缓冲溶液，分装到2mL的离心管中，-20℃保存，可放置6个月。使用前需测定酶活力。

3.2.4、氢氧化钠溶液（50mmol/L）：称取2g氢氧化钠（精确至0.01g），溶于水并稀释至1000mL，室3.2.5硼氢化钠溶液（10mg/mL）：准确称取适量硼氢化钠（精确至0.001g）于聚丙烯离心管中，用50mmol/L氢氧化钠溶液溶解，最终质量浓度为10mg/mL，用时现配。

3.2.6、乙酸溶液（200mmol/L）：吸取0.6mL冰乙酸，用水稀释至50mL，4℃保存，可放置2个月。

3.2.7乙酸钠溶液（200mmol/L）：称取1.36g三水乙酸钠（精确至0.01g），溶于水并稀释至50mL，4℃保存，可放置2个月。

3.2.8、乙酸钠缓冲溶液（pH4.5）：吸取14mL乙酸溶液和11mL乙酸钠溶液混合，并用水稀释至50mL，用时现配。

3.2.9、果聚糖酶溶液（455U/mL）：将果聚糖酶（活力为10000U）溶解于22mL乙酸钠缓冲溶液，分装到2mL的离心管中，-20℃保存，可放置6个月。使用前需测定酶活力。

3.2.10、氢氧化钠溶液（200mmol/L）：取10.4mL50%氢氧化钠溶液，用水稀释至1000mL，通入氮气保护，缓慢摇匀，室温下可放置7d。

3.2.11、氢氧化钠（150mmol/L）乙酸钠（500mmol/L）混合溶液：称取41g无水乙酸钠（精确至0.01g），用约500mL水溶解，0.22μm滤膜过滤，脱气10min，加入7.8mL50%氢氧化钠溶液，并用水

稀释至1000mL，通入氮气保护，缓慢摇匀，室温下可放置7d。

3.3、标准物质

果糖标准物质（C6H12O6）：纯度≥99.0%。

3.4、标准溶液的配制

3.4.1、果糖贮备溶液（2000mg/L）：准确称取0.05g（精确至0.1mg）80℃烘干至恒重的果糖标准物质

于50mL烧杯中，加入约10mL热水，待果糖溶解后，冷却至室温，用水稀释至25mL容量瓶中，摇匀，

4℃保存，可放置1个月。

3.4.2、果糖中间溶液（80.0mg/L）：吸取果糖贮备溶液1mL，用水稀释至25mL容量瓶中，用时现配。

3.4.3、果糖标准曲线工作溶液：取适量果糖中间溶液，用水配制成质量浓度为0.800mg/L、1.60mg/L、

4.00mg/L、8.00mg/L、16.0mg/L的标准曲线工作溶液。

3.5、材料

3.5.1、净化柱：反相固相萃取柱，填料为苯乙烯二乙烯基苯，2.5mL。

3.5.2、微孔滤膜：水相，0.22μm。

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